如何养开菲尔菌种？
《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.21 No.4(总86)
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开菲尔中菌种分离与鉴定方法初探
夏菠,周传云,张庆,罗阳,唐淑芬
(湖南农业大学食品科技学院，湖南长沙410128)
摘要：开菲尔乳是由数种乳酸菌及酵母菌共同发酵而得。本实验对开菲尔发酵液（即开菲尔乳）中的各种微生物进行了分离培养，依据其个体特征、糖发酵实验以及生理生化实验结果，筛选出3支菌株，对照乳酸菌、酵母菌、细菌分类鉴定表，确定此3支菌分别为：肠球菌属坚强肠球菌种；肠球菌属假鸟肠球菌种；乳杆菌属干酪乳杆菌。
关键词：开菲尔；分离；鉴定
To Explore the Separation and Identification of Bacteria in Kefir
Xia Bo, Zhou Chuan-yun, Zhang Qing，Luo Yang，Tang Shu-fen
（College of Food Science and Technology of Hunan Agriculture University , Changsha 410128, China）
Abstract: Kefir is fermented by many kinds of lactobacillus and yeasts. This experiment separated and cultivated several microbes in Kefir. According to their main characters, results of sugar fermentation and results of physiology and chemistry of bacterium, we identified 3 microbes.
Keywords: Kefir; Separation; Identification
开菲尔是一种多功能的保健性饮料，对于代谢混乱、动脉硬化、过敏性等病症均有疗效[1]。有证据表明高加索地区的人们普遍长寿是因为开菲尔的功劳。开菲尔尤其对于人类的消化功能有很大益处[2]。为了研究开菲尔乳的大规模，标准化生产工艺，制备发酵纯菌种及工业发酵用的开菲尔发酵剂成为技术开发的关键。本研究在开菲尔乳菌相分析的基础上[3]，对分离的主要菌种进行了鉴定。 1 材料与方法
1.1 实验材料
开菲尔粒：本食品科院微生物实验室提供。 无抗生素鲜牛奶：湖南农业大学奶牛场购得。 1.2 培养基[4]
（1）糖发酵培养基：蛋白胨2.0g，NaCl15.0g，KH2PO40.2g，1%溴麝香草酚蓝水溶液3ml（pH7.6–6 蓝色—黄色）；糖（分别加入葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、甘露醇、糊精组成六种糖发酵培养基）10.0g，加蒸馏水至1000ml，pH7.0–7.4。
（2）蛋白胨液体培养基（吲哚试验用）：蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，加水至1000ml，pH7.2–7.4。
（3）萄萄糖蛋白胨培养基：（V.P及M.R试验用）蛋白胨5.0 g，葡萄糖5.0 g，NaCl 5.0 g，加水至1000ml，pH7.2–7.4。
（4）柠檬酸铁铵培养基（产硫化氢实验用）：柠
檬酸铁铵（棕色）0.5g ，Na2S2O3 0.5g，牛肉膏蛋白
胨琼脂（1.5%）培养基 1000ml，pH7.4，121ºC灭菌20min，搁成直立柱。 1.3 主要仪器设备
超净工作台，压力蒸汽消毒器，电子天平，pH计，显微镜，恒温培养箱，常规玻璃皿。 1.4 实验方法
1.4.1 开菲尔发酵液的制备
将开菲尔粒按照1:50的比例，加入灭菌鲜牛奶中，在25ºC下培养24h。过滤分离出初次活化的开菲尔粒，加入到新灭菌奶中继续培养24h。如此连续活化3次，取最后一次发酵液以备实验用。 1.4.2 菌种的分离
吸取开菲尔发酵液25ml，放入含有225ml灭菌生理盐水及有玻璃珠的三角瓶内，摇匀后制成稀释10倍的开菲尔发酵液，再利用无菌生理盐水试管对其进行10倍递增稀释，直至稀释度达到10-14。吸取最后的稀释液分别在MRS培养基（乳酸菌选择培养基）、PDA培养基（酵母菌选择培养基）、ELLIKER琼脂培养基（醋酸菌选择培养基）上均匀涂布，各设2个重复，置于25ºC下培养72h，然后挑取三种培养基上的所有优势菌落，分别移入相应的斜面培养基上进行培养。培养好后，低温保藏，并对所有菌株进行染色镜检观察，以确定菌株个体形态。 1.4.3 菌种初筛
开菲尔菌种是越大越好吗
开菲尔菌种是一种益生菌，能够在肠道内生长并产生有益的作用。是否越大越好要看具体情况而定。 通常来说，益生菌的数量应该适量，并且应该是均衡的，过多或过少都会影响到身体的健康。如果摄入过多的开菲尔菌，可能会引起肠胃不适，如腹泻、便秘等。而如果摄入过少，则可能无法起到预期的作用。 此外，对于开菲尔菌种的选择，还应根据个人情况进行选择。不同的开菲尔菌品种可能对不同的人群产生不同的效果，例如有的人可能更适合Lactobacillus rhamnosus GG，而另一些人则可能更适合Bifidobacterium lactis等。 因此，在选择开菲尔菌种时，应根据自己的健康状况和身体特点，选用适合自己的菌株，并且保持适度的摄入量。如果需要使用开菲尔菌进行肠道调理，最好在医生的指导下进行。